磋议空洞

本磋议论述了一例74岁男性患者的荒僻胶质母细胞瘤，主要滋长在软脑膜。患者发扬露面痛、手抖和理解圮绝，MRI露出脑干和小脑软脑膜增强，但未见显豁的瘤块。细胞游离DNA（circulating free DNA, cfDNA）是指在血液或其他体液中游离存在的DNA片断。这些DNA片断时常源自多种细胞，包括肿瘤细胞、凋一火或坏死的平时细胞。cfDNA的分析在医学磋议和临床会诊中具有紧迫意念念。cfDNA不错用于检测肿瘤特异性突变，匡助会诊癌症、监测肿瘤进展和评估调整反馈。尽管传统细胞学分析未能检测到肿瘤细胞，通过脑脊液中的细胞游离DNA纳米孔测序，磋议东说念主员到手识别出TERT脱手子突变和特征性的拷贝数变异。此环节露出了脑脊液DNA的后劲，算作一种快速且微创的会诊器具，为高等别胶质瘤的说明提供了有劲凭证。这一发现为临床医师在解决肖似病例时提供了新的意见，也提供了明确的会诊依据，有助于制定后续的调整决策。

病例论述

患者为74岁的男性，症状为头痛、手抖、步态不稳及理解圮绝，并在前往常两个月内缓缓加剧。患者既往有前线腺癌病史，5年前剿袭了辐射调整，2个月前在回肠终局发现神经内分泌肿瘤（neuroendocrine tumor，NET）1级。脑MRI露出：未见脑本体内病变，脑干、小脑及颅神经周围软脑膜可见强化（图1a）。那时的阔别会诊包括“神经炎症性疾病”和转动性疾病（不以外前线腺癌的软脑膜转动和1级NET）。除回肠NET外，PET-CT扫描未发现颅外原发肿瘤或转动性病灶。腰椎穿刺获取的脑脊液露出白细胞数目轻度增多(14个细胞/µl），葡萄糖水平正常（2.9 mmol/l），总卵白水平增多（8.75 g/l），与软脑膜转动性疾病一致。在第三次腰椎穿刺时，脑脊液的细胞学和轮回肿瘤细胞分析仍然为阴性。但是，对cfDNA的下一代测序露出，端粒酶逆转录酶（telomerase reverse transcriptase, TERT）脱手子突变，加强了患者践诺上患有软脑膜恶性肿瘤的假定。

图1：临床会诊学图。a MRI增强像露出小脑和脑桥周围的强化灶（I、II中的箭头）。两侧颅神经VII、VIII的强化（III中的箭头）。b 脑脊液DNA测序所得序列reads的大小散播。c 通过纳米孔测序获取的CNV图谱。d 肿瘤分类为胶质母细胞瘤-MID

磋议者聘请对脑脊液进行纳米孔测序。从2 ml的脑脊液中提真金不怕火了约200 ng的DNA。使用退换后的文库准备决策，对100 ng的样本进行测序，得到1800万reads。映射的读长露出了cfDNA典型的梗概 150个碱基对周期性（图1b），大部分片断在143-175个碱基对范围内。拷贝数变异（copy-number variation，CNV）特征（图1c）露出了出某些变化，包括PDGFRA和MDM4增益和CDKN2A/B亏空，高偏差标明肿瘤分数高。在齐备或下采样数据集上进行DNA甲基化分析，得到了胶质母细胞瘤、亚型中线（GBM-MID）的高着实度评分（图1d）。进行DNA甲基化分析详情了GBM-MID的分类以及CNV谱的改换。

琢磨到颅内疾病和临床恶化，患者得到了最佳的补助调整。但是，患者的病情赶紧恶化，很快就弃世了。病理露出了分散性增厚和不透明软脑膜，尤其是在额叶（图2a)、小脑和脑干周围。肉眼不雅察未发现脑本体内有肿瘤肿块。在显微镜下，肿瘤细胞在悉数软脑膜中平凡出现浸润（图2b）。显微镜下露出肿瘤在脑本体内稍许滋长，在脑室的室管膜下方（图2c、d）和中脑的皮质下方存在实足性浸润性滋长。肿瘤细胞呈星形胶质细胞模式，细胞核高度不典型，染色质大略（图2d）。免疫组化证实了肿瘤的胶质性质（Olig2；图2e）。偶尔不雅察到有丝分裂象，但衰退坏死和显豁的微血管增生。值得注方针是，肿瘤细胞增殖活性通过Ki-67染色露出为中至高度（约20-30%；图2f）。这些病理成果聚拢TERT脱手子突变的已然，使得不错进行胶质母细胞瘤（IDH野生型）的组分子会诊，这与患者生前脑脊液纳米孔测序所提议的会诊王人备一致。

图2： 病理。脑切片露出软脑膜污染增厚（a，白色箭头）。显微镜下，非典型细胞实足散播在软膜腔内（b）。在某些区域，这些细胞也稍许存在于室管膜下/脑室周围，举例围聚海马（c，d，方框），在相邻的深层脑沟中，这些细胞的积攒更为密集（*）。Olig-2（e）和Ki-67（f）的免疫组化染色差异说明了肿瘤的胶质性质和增殖活性。L：软膜；CTX：大脑皮层的分子层；HE：苏木精-伊红染色。

磋磨

1.磋议者论述了一例IDH野生型胶质母细胞瘤，其主要滋长在软脑膜。这类病例既往很少有报说念，会诊特殊具有挑战性。讹诈脑脊液cfDNA的纳米孔测序，进行DNA甲基化分类是一种快速和微创的环节，以获取径直的会诊提议。

2.磋议者假定从脑脊液中回收的无数肿瘤DNA是由于肿瘤细胞与脑脊液之间的大面积地战役。在小且局限性的肿瘤中，cfDNA的获取和测序可能更具挑战性。TERT脱手子突变的发现、CNV特征的变化以及高置信度的分类为高等别胶质瘤/胶质母细胞瘤的会诊提供了充分的凭证。

3.准确的会诊对患者偏抓家属特殊有匡助，因为这为不竭进行姑息调整奠定了基础。

参考文件：Sol Nik,Kooi Evert-Jan世博体育App全站下载APP,Pagès-Gallego Marc et al. Glioblastoma, IDH-wildtype with primarily leptomeningeal localization diagnosed by nanopore sequencing of cell-free DNA from cerebrospinal fluid.[J] .Acta Neuropathol, 2024, 148: 35.